ESTERILIZACIÓN (AUTOCLAVE Y ESTUFA DE SECADO)

El 25 de noviembre nuestra profesora nos compartió los siguientes conocimientos:

• Esterilización: Es la eliminación total de las bacterias. Generalmente usa dos equipos, autoclave y el horno.
• Las bacterias no se desarollan si no hay una condición como nutrientes o un buen pH.

• La esterilización se hace por vía: seca y húmeda.
• Por vía seca se usa el horno de secado por 2hrs a 180°. Se pueden esterilizar materiales de metal y vidrio.
• Por vía húmeda se usa la autoclave, durante 15min, la temperatura no es controlada, si no se controla la presión y se esterilizan medios de cultivo y material de vidrio.

MATERIALES:

• Cinta testigo
• Caja de petri
• Tijera
• Algodón
• Tubos de ensaye
• Matraz Enlermeyer
• Gradilla
• Papel estraza
• Apósitos

PROCEDIMIENTO

1. Preparar el matraz. Se hace un tapón con el apósito, se hace un gorrito con el papel estraza y se asegura con la cinta.
2. Llenar el autoclave de agua (destilada de preferencia) hasta la marca roja que tiene.
3. Verificar las condiciones de la camisa.
4. Introducir la bandeja o camisa con todo el material a esterilizar.
5. Cerrar y sellar en forma de cruz
6. Cerrar  o verificar que esté cerrada la válvula de escape.
7. Conectar y encender al máximo.
8. Cuando llegue la aguja a 1 en el manómetro, se cuentan 15 min, y se checa que no pase de 1 con la válvula de escape.
9. Pasados los 15min, se abre en su totalidad la válvula de escape y se espera 5min.
10. Se abre
11. Se saca la camisa con ayuda de la manigueta. Se abre el desagüe, se enjuaga y se seca.
12. Se sacan las muestras, se lava y se seca la camisa. Se guarda en el autoclave y éste se cierra y se guarda.

• La caja de petri se envuelve en papel estraza como se envuelven las tortillas, evitando tantas arrugas.
• El tubo de ensaye se va a envolver en una tira larga. Antes se le coloca un tapón de algodón (la torunda). Se comienza a enrollar, desde donde está la torunda hasta el final del tubo de ensaye, al final se asegura con un pequeño pedazo de cinta testigo. La pipeta es el mismo procedimiento.
• La torunda debe quedar muy apretada y se debe dejar un pedazo de fuera para poder tomarla cuando se saque la muestra.

CROMATOGRAFÍA DE CAPA FINA Y DE COLUMNA (PRÁCTICAS)

(16 y 17 de octubre)

La cromatografía consiste en separar, con ayuda de solventes, mezclas de gases o líquidos al conducirlas a través de un medio poroso y adecuado. El equipo para tal operación puede ser tan simple como una columna rellena, un papel o una placa que contienen el medio poroso, o ien un equipo tan sofisticado como lo es un cromatógrafo.

Las planeaciones de las prácticas de las cromatografías la pueden encontrar aquí: Planeación

Cromatografía de capa fina

En la cromatografía en capa fina (CCF) la fase estacionaria consiste en una capa delgada de un adsorbente (como por ejemplo gel de sílice, alúmina o celulosa) depositada sobre un soporte plano como una placa de vidrio, o una lámina de aluminio o de plástico.

La CCF es una técnica analítica y tiene como objetivo el análisis de una mezcla de componentes. 
El proceso es similar a la cromatografía de papel con la ventaja de que se desarrolla más rápidamente, proporciona mejores separaciones y se puede elegir entre diferentes absorbentes. La CCF es una técnica estándar en el laboratorio de química orgánica. Debido a su simplicidad y velocidad, la CCF se utiliza a menudo para monitorizar las reacciones químicas y también para el análisis cualitativo de los productos de una reacción, puesto que permite conocer de manera rápida y sencilla cuántos componentes hay en una mezcla.

Aquí les dejo el link del video de nuestra práctica: Cromatografía de capa fina

Cromatografía de columna

Es una técnica de purificación, puesto que permite aislar los compuestos deseados de una mezcla.

La cromatografía en columna utiliza una columna de vidrio vertical que se llena con un soporte sólido adsorbente (fase estacionaria: los más utilizados son gel de sílice (SiO2) y alúmina (Al2O3).

 La muestra que se quiere separar se deposita en la parte superior de este soporte. El resto de la columna se llena con el eluyente (disolvente que constituye la fase móvil) que, por efecto de la gravedad, hace mover la muestra a través de la columna. Se establece un equilibrio entre el soluto adsorbido en la fase estacionaria y el disolvente eluyente que fluye por la columna. Debido a que cada uno de los componentes de una mezcla establecerá interacciones diferentes con la fase estacionaria y la móvil, serán transportados a diferentes velocidades y se conseguirá su separación. 

Desafortunadamente, no pude grabar el proceso de nuestra práctica, sin embargo, al principio de esta entrada está el link de la planeación, así que solo lo tengo por escrito. De cualquier forma, les dejo una foto de nuestro resultado final: 

Se puede apreciar el recorrido del compuesto

En cuanto a nuestros resultados:

CROMATOGRAFÍA DE CAPA FINA

Los recorridos del compuesto en cada disolvente

Calculado el Factor de partición

Distancia del compuesto	Distancia del disolvente	Fp= d compuesto/d disolvente
5.8cm	Hexano + cloroformo 6.6cm	.87cm
5.6cm	Etanol + cloroformo 6.2cm	9.0cm
7.2cm	Etanol + acetona 4.6 cm	1.5cm
7cm	Acetona + cloroformo 6.8cm	1.02cm
2cm	Acetona 9cm	.22cm
8cm	Hexano 9cm	.88cm
8cm	Cloroformo 8.5cm	.94cm
6.7cm	Etanol 7.8cm	.85cm

El mejor disolvente es el cloroformo y el menos eficiente, es la acetona.

CROMATOGRAFÍA DE COLUMNA

Compuesto: Recorrió 2.8cm

Solución: 5cm

Fp= 2.8cm/5cm = .56 cm

*El etanol es un buen disolvente.

Espero que la información compartida sea de su agrado, buen día. :)

PLANEACIÓN DE CROMATOGRAFÍAS

(13-oct-2014)

En estos días se estuvo viendo sobre los métodos de separación de mezclas, en este caso, planeamos la cromatografía de capa fina y de columna. La cromatografía tiene 2 fases: móvil y estacionaria.

Cromatografía de capa fina

Materiales:

• 1 pliego de papel filtro
• 5 frascos con tapa
• Pipeta pasteur
• Tubo de ensaye
• Mortero con pistilo
• Espinaca
• Acetona, cloroformo, etanol y hexano.
• Embudo de entalle delgado.

Procedimiento

1. Se preparan disoluciones proporcionales de 2:2 es decir, 2ml de x sustancias + 2ml de y sustancia. (Acetona+cloroformo, etanol+cloroformo, hexano+cloroformo y etanol+acetona). Cada disolución se vierte en un frasco correspondiente y se tapa, para evitar que se evaporen las sustancias. De igual manera habrán cuatro frascos con cada sustancia sin mezclar.
2. Se tritura un poco la espinaca en el mortero, después se le agregan 4ml de hexano y 2ml de etanol (se obtendrá clorofila y carotenoides).
3. Luego se termina de triturar ,la espinaca, se obtiene una fase orgánica (el líquido verde que es la clorofila). Se vierte la fase en el tubo de ensaye con ayuda del embudo. Se tapa el tubo y se deja reposar 3min.
4. Observar y agregar de 1 a 2g de sulfato de sodio (Na2SO4), agitar y volver a dejar reposar durante 3min.
5. Succionar la muestra con la pipeta pasteur y poner una gota en 8 tiras de papel filtro, a 1cm aproximadamente del extremo.
6. Colocar las tiras en cada frasco. Dejar reposar hasta observar la cromatografía.

*El mejor disolvente es donde se muestra la mayor cantidad de colores en la cual la muestra haya recorrido.

*El factor de partición es la distancia recorrida por el compuesto, dividido entre la distancia recorrida por el disolvente. Si el Fp>.5, entonces, es un buen disolvente.

Cromatografía de columna

Materiales:

• Jeringa de 5ml
• Espinaca
• Hexano
• Pipeta pasteur
• Mortero con pistilo
• Sílica gel

Procedimiento:

1. Al igual que en la de columna, se tritura la hoja. Se le agregan 4ml de hexano, y se vuelve a triturar hasta obtener la fase orgánica.
2. Después a la jeringa se le quita la aguja, y se le coloca un pedazo de algodón para tapar la entrada de la aguja. Se le agrega sílica gel y después la fase orgánica.
3. Una vez hecho  esto, se le agrega etanol y se tapa la jeringa con otro pedazo de algodón. Se deja reposar y luego se observan las columnas cromatográficas.

PRÁCTICA DE DESTILACIÓN Y SUBLIMACIÓN

(10-oct-2014)

El día 10 de octubre, realizamos la destilación y la sublimación previamente planeadas (Prácticas).

Les dejo a continuación el video de nuestra práctica, así como los resultados que obtuvimos:

Destilación y sublimación

Estos fueron nuestros resultados:

Sustancias	Tiempo en destilarse
Alcohol	6 min y 17 s
Agua	10min y 17 s

La prueba de que lo que recuperamos fue realmente alcohol (recuperamos 5ml):

En cuanto a la sublimación:

En el proceso de la sublimación, pudimos apreciar distintos cambios en la pastilla del baño. Primero pasó a estado gaseoso y debajo de la cápsula, se formaron cristales, después, se veía como salía el humo por la boca del vaso de precipitado, pasado un tiempo, se condensó, lo curioso es que el agua caía desde en medio como un pequeño chorro, no desde diversos puntos de la cápsula.

Espero que la información presentada sea de mucho apoyo para ustedes. :)

TÉCNICA Y ARMADO DE EQUIPO DE DESTILACIÓN

(29-08-2014)

Como en una entrada pasada se publicó, existen diversas formas de llevar a cabo un experimento, en este caso vimos la técnica, el armado y desarmado de un equipo de destilación.

En primer momento, la profesora nos explicó cómo estaba armado un equipo de destilación, teniendo dos ya hechos por un grupo anterior, uno estaba bien armado mientras que el otro presentaba un muy pequeño detalle que pasó desapercibido. Observamos cada parte del equipo e hicimos nuestra propia técnica de armado.

Visualizamos que deberíamos poner primero así como hicimos un esquema: 

Los trazos no son del todo perfecto pues fue hecho a contratiempo, pero para nosotros fue entendible cada uno de los elementos

Los materiales que utilizamos fueron:

• 3 Mangueras o tubos de hulex.
• Mechero Bunsen.
• 2 soporte universal.
• Tela de alambre con asbesto.
• Termómetro.
• Matraz de destilación.
• Anillo de hierro.
• Pinza de soporte.
• Corchos
• Perlas de ebullición.
• Sistema de enfriamiento o refrigerante.
• Pinza de nuez.
• Glicerina.
• Pases o llaves de agua y de gas.
• Pinza de tres dedos.

Nuestro procedimiento fue:

1. Colocamos los soportes a una cierta distancia, ni muy lejos ni muy cerca, en uno colocamos la pinza de soporte para la pinza de tres dedos y en el otro el anillo de hierro.
2. Colocamos el mechero Bunsen a tres dedos debajo del anillo de hierro, previamente checado y conectado a un pase de gas con una manguera (es importante que la manguera no esté pegada al mechero, pues puede derretirse y romperse). De ahí colocamos la tela de alambre con asbesto.
3. Colocamos la pinza de nuez y el matraz de destilación (las perlas ya deben de ir dentro del matraz). El matraz debe tener un corcho en el tubo conector y en la boca.
4. Colocamos el termómetro en el corcho que está en la boca del matraz, el vulvo debe quedar a la altura de donde saldrá el vapor de la destilación.
5. Colocamos la pinza de tres dedos en la pinza de soporte, unimos el refrigerante al tubo conector con el corcho. Ajustamos la pinza de tres dedos al refrigerante.
6. Conectamos una manguera a la entrada que está cerca de donde está conectado el refrigerante con el matraz, ésta manguera va directo al desagüe. En la otra entrada se colocó otra manguera que va conectada a la llave de agua (se colocó allí pues es donde se lleva a cabo el enfriamiento).
7. Por último colocamos el Matraz Erlenmeyer debajo de la salida del refrigerante.

Nota: la glicerina se utilizó para conectar las mangueras y corchos, de tal manera que no fuera difícil ponerlos y quitarlos.

Este fue nuestro resultado:

Equipo de destilación armado

Para desarmarlo:

1. Quitamos el mechero, separándolo de la manguera y enrollando esta última para no dañarla.
2. Se retiró el matraz Enlermeyer con el destilado poniéndolo en el centro de la mesa.
3. Desconectamos las mangueras realizando movimientos desenroscantes para evitar tirar algo, todo con paciencia.
4. Quitamos el termómetro con ayuda de las guanteleta, desenroscándolo y colocándolo en el centro de la mesa para evitar un accidente, de forma vertical.
5. Aflojamos la pinza de tres dedos, quitamos el refrigerante desenroscándolo del matraz y poniéndolo a lado del termómetro para que no ruede y se caiga.
6. Quitamos la pinza de soporte y de tres dedos.
7. Aflojamos la pinza de nuez, sacamos el matraz con los corchos en él y lo colocamos en el lavabo para evitar que caiga.
8. Quitamos la pinza de nuez, con ayuda de la guanteleta quitamos la tela de alambre y el anillo de hierro.
9. Colocamos todos los materiales usados en la bandeja, previamente lavados.

Mi equipo con el material ya en la bandeja y nuestro esquema

Aprender estas técnicas tan básicas nos facilitará el desarrollo de futuros experimentos en nuestro laboratorio. Que la información presentada sea de provecho para ustedes y para mi. Feliz vida.